细胞传代培养

根据细胞生长的恃点，细胞传代培养方法有3种：贴壁生长的癌细胞传代、半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）、浮动植物的生长组织细胞传代。

◆ 贴壁萌发的组织用消化不好法传代；

◆ 部分贴壁生长的细胞用直接吹打可传代；

◆ 悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打传代。

实验所建筑材料：血细胞、D-Hanks液、胎牛血清、DMEM培养基 / RPMI1640培养基、Penicillin-Streptomycin（P/S双抗）、胰蛋白酶

医疗仪器与办公耗材：水净化做工作台图片、离心法式机、常温水浴箱、保鲜柜、倒放抗腐蚀性体视显微镜、塑造培植箱、破璃瓶、神经元塑造培植瓶/皿、废渣缸、离心法式管、红血球运算板、不同规格的移液器及其配套的无菌吸头、吸管

1.  贴壁组织的消化不良法传代：

1）先吸除或扔掉瓶内旧培养出液。

2）D-Hanks液洗2～3次。

3）向瓶内参与有益健康助消化不好液（胰蛋白质酶或与EDTA结合液）缓缓的转动塑造培养瓶，使助消化不好液流遍很多受损细胞单单从表面。（准备：胰淀粉酶酶要预温，的温度37℃上下为宜。）

4）消化系统酶不好非常好在37℃坏境下确定，消化系统酶不好2～5 min 后把激发瓶平放电子显微镜下确定关察，出现 胞质回缩，细胞核宽度过大后，应马上结束消化系统酶不好。

5）吸除或扔掉肠蠕动系统系统液，如用EDTA肠蠕动系统系统，需要Hanks液数毫升，轻柔匀速转动养育瓶把留肠蠕动系统系统液冲掉，再“添加养育液。如仅用胰核蛋白酶可之间加少量含血清的养育液，撤消肠蠕动系统系统。

6）用弯管吸管，产生瓶内激发液，经常吹打瓶壁細胞。从激发瓶底层其它方面现在开始到另其它方面完成，以确保安全生产所以底层都被吹到，使細胞脱离了瓶壁后产生細胞悬液。吹打时動作要轻盈，不要再使劲儿过猛。

7） 细胞核筛选后各自预防接种在新的锻炼瓶内。

8）置于37℃细胞核塑造教育箱塑造教育。（要留意：要要定期洞察分析受损细胞，如挖掘污染问题，应立即正确处理。）

2.  飘浮肿瘤細胞的传代：飘浮肿瘤細胞传代可离心法抽取肿瘤細胞后传代，或简单传代。

离心式传代法：

1） 将神经元连到锻炼液一起适当转移到15 ml 离心力管道。

2） 800~1000 rpm离心式5 min。（特别留意：离心法式发动机转速比要好。发动机转速比过低，可以合理有效脱离神经元；离心法式网络速度过大，精力偏长，会挤压成型神经元造破损以至于生亡。）

3） 弃去上清，加新的培养出液到抽滤管壁内，用吸管吹打产生上皮细胞悬液。

4） 筛选，各疫苗注射在新的陪养瓶内。

直观传代法：

让悬浮物細胞逐渐沉积在瓶底后，将上清液吸掉1/2~2/3，其次用吸管吹打养成細胞悬液后再传代。

3.  一部分贴壁组织的传代

1）部分贴壁不牢的细胞，如Hela细胞等，不经消化处理直接吹打可使细胞从壁上脱落下来，而进行传代。
2）对绝大部分贴壁生长的细胞，因直接吹打对细胞损伤较大，细胞常有较大数量的丢失，因而需消化后，才能吹打传代。